手持式叶绿素荧光测定仪原理
鉴定叶绿体方法？
鉴定叶绿体方法？
1.用石油醚萃取丙酮提取液中的叶绿体色素。在用丙酮从鲜叶中提取的色素粗提液中不仅含有叶绿体色素，而且还含有可溶于丙酮的其他化合物。为了使被分离崐色素更好地用于理化性质的观察，须把丙酮提取液中的色素转移到石油醚中，具体方法如下：
将丙酮提取液倒入分液漏斗中，加等量或半量的石油醚(沸点为60-90℃)，用力振荡后静置，待分层清晰后弃去丙酮层。加蒸馏水洗石油醚3-4次，轻轻摇动，洗去石油醚中的丙酮和溶于水的其他物质。每次洗涤后需静止片刻，然后弃去下层的丙酮水层，最后将石油醚色素提取液置棕色瓶中备用。
2.叶绿素的荧光观察：向试管中倒入3ml石油醚色素提取液，从与入射光垂直的方向可观察到血红色的荧光。比较色素溶液在反射光与透射光下的颜色。
3.叶绿素的皂化反应：向观察过荧光的试管，沿壁缓缓加入2ml新配制的30％KOH甲醇溶液，可看到KOH溶液沉在下层。然后摇动，静置10分钟，观察变化情况。
4.铜代叶绿素反应：取上述叶绿体色素5ml，放入试管中，加50％醋酸数滴摇匀，观察溶液颜色的变化。
当溶液变褐色后，倾出一半与另一试管，投入醋酸铜粉末少许，微微加热，观察溶液颜色的变化，与未加醋酸铜的一半相比较。
另取含醋酸铜的醋酸溶液20ml，放入烧杯，取新鲜绿叶一片，放入溶液中，用酒精灯缓缓加热，观察叶片颜色的变化，直至颜色不再变化为止，解释上述颜色的变化过程。
5.光对叶绿素的破坏作用：取二个试管，分别装叶绿体色素提取液3ml，一个置暗处或用黑纸包裹，另一个置于强光(太阳或强光源)下，经1-2小时后，观察二管溶液的颜色变化。
也可用本实验二中已色层分析的层析纸，剪截成两半，每个半张上都有相同色素带，半张放在暗处，半张置于光下，半小时后比较两张色谱上各色带的颜色变化。
叶绿素的发射光谱是什么？
荧光现象。
荧光现象：是指叶
(1)对着光源观察叶绿素提取液时，看到的是叶绿素的吸收光谱。由于叶绿素提取液吸收的绿光部分最少，故用肉眼观察到的为绿色透射光。
(2)背光源观察叶绿素提取液时，看到的是叶绿素分子受激发后所产生的发射光谱。当叶绿素分子吸收光子后，就由最稳定的、能量最低的基态提高到一个不稳定的、高能量的激发态。由于激发态不稳定，因此发射光波(此光波即为荧光)，消失能量，迅速由激发态回到基态。叶绿素分子吸收的光能有一部分用于分子内部振动上，辐射出的能量就小。由“光子说”可知，光是以一份一份光子的形式不连续传播的，而且Ehv hc/λ，即波长与光子能量成反比。因此，反射出的光波波长比入射光波的波长长，叶绿素提取液在反射光下呈红色。叶绿素溶液在透射光下呈绿色，在反射光下呈红色的现象叫做荧光现象